天津市兰力科化学电子高技术有限公司
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电化学发光反应的步骤
点击次数:1399 更新时间:2023-05-24
电化学发光反应:电化学发光(electro-chemiluminescence,ECL)是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,实际上包括了电化学和化学发光两个过程。化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2和电子供体三丙胺(TPA)在阳电极表面同时各失去一个电子发生氧化反应。二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价,后者是一种强氧化剂。TPA被氧化成阳离子自由基TPA+*,后者很不稳定,自发地失去一个质子(H+),形成自由基TPA*,这是一种非常强的还原剂。这两个高反应基团在电极表面迅速反应,三价的[Ru(bpy)3]3+被还原形成激发态的二价[Ru(bpy)3]2+*,能量来源于[Ru(bpy)3]3+和TPA*之间存在的高电化学电位差。TPA*自身被氧化成二丙胺和丙醛。接着激发态的   [Ru(bpy)3]2+*衰减成基态的[Ru(bpy)3]2+,同时发射一个波长620nm的光子。这一过程在电极表面周而复始地进行,产生许多光子,使光信号得以增强。
电化学发光反应的步骤:
(1)将试管内两步反应结束的反应液输入流动池,由于磁铁吸引,磁性微粒被吸着在电极上,其余反应物流出流动池,完成游离的和结合的标记抗体的分离。
(2)将TPA溶液送入流动池,将残余的游离标记抗体排出流动池,在流动池中充满TPA溶液。
(3)撤下磁铁,电极上通电,三联吡啶钌与TPA发生电化学发光反应,发出的光被光电倍增管收集,测定光强度。
(4)通过换算得出待测标本中的抗原浓度。
(5)在流动池中送入清洗液,将反应物冲洗,即可测定下一个标本。
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